Кафедра биофизики

  • Increase font size
  • Default font size
  • Decrease font size
Главная страница Практикумы Отделение медицинской биохимии Отделение биохимии. 3 курс. Методические пособия к практикуму.

Отделение биохимии. 3 курс. Методические пособия к практикуму.

Email Печать PDF
Цикл: "Хемилюминесценция".
Материалы для подготовки к контрольной для отделения биохимии.


Лабораторная работа №5. Изучение антиоксидантной активности веществ в модельной системе окисления люминола, индуцированного смесью метгемоглобина и пероксида водорода.

Лабораторная работа №6. Исследование кинетики хемилюминесценции, сопровождающей перекисное окисление липидов в модельной системе окисления фосфолипидных липосом, индуцированного ионами двухвалентного железа.

Лабораторная работа №7. Математическое моделирование кинетики Fe2+-индуцированного перекисного окисления фосфолипидных липосом по данным хемилюминесцентного анализа.

Хемилюминометр ПХЛ-01. Описание.

Хемилюминометр ХЛ-003. Описание.

Хемилюминометр Lum-100. Описание.


Список вопросов для подготовки:
1. Хемилюминесценция. Виды хемилюминесценции. Хемилюминесценция в биологических системах.
2. Стадии хемилюминесценции. Эмиттер хемилюминесценции. Квантовый выход возбуждения и испускания эмиттера. Квантовый выход хемилюминесценции.
3. Взаимосвязь квантового выхода испускания и квантового выхода фотолюминесценции эмиттера.
4. Спектр хемилюминесценции. Взаимосвязь спектра хемилюминесценции и спектра испускания фотолюминесценции эмиттера.
5. Измерение хемилюминесценции. Приборы для измерения хемилюминесценции. Хемилюминометр, устройство, принцип работы.
6. Время жизни возбуждённого состояния. Собственное и реальное время жизни возбуждённого состояния. Взаимосвязь между квантовым выходом и временем жизни возбуждённого состояния.
7. Тушение хемилюминесценции. Физическое и химическое тушение хемилюминесценции.
8. Физическое тушение хемилюминесценции. Спектральные закономерности физического тушения. Физические активаторы и тушители хемилюминесценции.
9. Влияние физических тушителей на интенсивность люминесценции, квантовый выход и время жизни возбуждённого состояния. Уравнение Штерна-Фольмера.
10. Химическое тушение хемилюминесценции. Спектральные закономерности химического тушения. Химические активаторы и тушители хемилюминесценции. Хемилюминесцентные зонды.
11. Кислород, химическое строение, распределение электронов по молекулярным орбиталям. Возбуждённые формы кислорода. Продукты восстановления кислорода. Активные формы кислорода (АФК).
12. Химические реакции взаимодействия активных форм кислорода в водных растворах. Реакция дисмутации, реакция Хабера-Вайса, реакция разложения пероксида водорода.
13. Влияние ионов металлов переменной валентности на реакции взаимодействия активных форм кислорода в водных растворах. Реакция Фентона.
14. Хемилюминесценция при взаимодействии активных форм кислорода.
15. Пероксидное окисление липидов (ПОЛ). Стадии ПОЛ. Влияние ионов металлов переменной валентности.
16. Хемилюминесценция, сопровождающая процесс ПОЛ. Химические реакции, лежащие в основе, спектр свечения.
17. Хемилюминесценция при ПОЛ, индуцированном ионами двухвалентного железа. Стадии кинетической кривой хемилюминесценции. Химические реакции лежащие в основе каждой стадии.
18. Модельные системы окисления. Применение активаторов хемилюминесценции для усиления свечения хемилюминесценции в модельных системах окисления.
19. Ингибиторы свободно-радикальных реакций. Антиоксиданты. Антиоксидантная активность.
20. Внеклеточные антиоксиданты. Церулоплазмин. Трансферрин. Мочевая кислота. Аскорбиновая кислота. Флавоноиды.
21. Внутриклеточные антиоксиданты. Супероксиддисмутаза, каталаза, глутатионпероксидаза.
22. Антиоксиданты клеточных мембран. Токоферолы. Каротиноиды.


Цикл: "Абсорбционная спектроскопия".

Задачи по теме "Спектрофотометрия".

Спектрофотометр СФ-46. Описание.

Качественный и количественный спектрофотометрический анализ биомолекул.
Лабораторная работа №1 и №2.

Список вопросов для подготовки.
1. Абсорбционная спектроскопия. Электронная абсорбционная спектроскопия. Типы электронной абсорбционной спектроскопии в зависимости от используемого диапазона электромагнитного излучения (ЭМИ).
2. Поглощение ЭМИ атомами и молекулами. Типы электронных переходов в молекулах, связанных с поглощением ЭМИ оптического диапазона спектра.
3. Хромофорные группы (хромофоры). Ауксохромы. Батохромный и гипсохромный эффект. Гипохромный и гиперхромный эффект.
4. Связь химической структуры молекул с их спектральными свойствами. Спектры поглощения молекул с одинарными, двойными, тройными и двойными сопряжёнными связями. Взаимодействие хромофоров.
5. Метод спектрофотометрии. Основные величины, используемые в спектрофотометрии. Спектры пропускания и спектры поглощения.
6. Закон Бугера-Ламберта-Бэра, условия его соблюдения. Закон аддитивности оптических плотностей.
7. Техника спектрофотометрического анализа. Источники излучения. Светофильтры и монохроматоры. Приёмники излучения. Типы спектрофотометров.
8. Качественный спектрофотометрический анализ.
9. Количественный спектрофотометрический анализ.
10. Чувствительность спектрофотометрического анализа. Абсолютная и относительная чувствительность. Коэффициент чувствительности. Минимальная измеряемая концентрация.
11. Точность спектрофотометрических измерений. Факторы от которых зависит воспроизводимость и правильность измерений в спектрофотометрическом анализе.
12. Эффект светорассеяния.
13. Эффект сита (проскока).

Цикл: "Люминесцентная спектроскопия".

Качественный и количественный флуориметрический анализ биомолекул.
Лабораторная работа №3 и №4.


Список вопросов для подготовки.
1. Люминесценция. Виды люминесценции в зависимости от способа возбуждения. Фотолюминесценция.
2. Типы энергетических переходов в молекулах при поглощении света оптического диапазона спектра. Колебательная релаксация. Внутренняя и интеркомбинационная конверсия. Флуоресценция и фосфоресценция. Длительности и вероятности данных процессов.
3. Правило Каши. Исключение из правила Каши.
4. Закон Стокса-Ломмеля. Стоксов сдвиг. "Стоксовая" и "антистоксовая" области спектров. Влияние растворителей на спектры люминесценции.
5. Правило Левшина. Исключения из правила Левшина.
6. Закон Вавилова. Энергетический и квантовый выход люминесценции, связь между ними.
7. Техника флуоресцентной спектроскопии. Флуориметры и спектрофлуориметры.
8. Спектры флуоресценции. Спектры возбуждения и испускания флуоресценции. Синхронные спектры флуоресценции.
9. Выражение для интенсивности флуоресценции. Выражение для интенсивности флуоресценции при регистрации спектров возбуждения и спектров испускания.
10. Коррекция спектров возбуждения и испускания флуоресценции.
11. Качественный флуориметрический анализ. Качественный анализ по спектрам испускания флуоресценции.
12. Взаимосвязь между спектром поглощения и спектром возбуждения флуоресценции. Применение спектров возбуждения флуоресценции в качественном анализе.
13. Количественный флуориметрический анализ. Связь между интенсивностью флуоресценции и концентрацией вещества.
14. Методы количественного определения веществ во флуориметрическом анализе. Метод градуировочного графика, метод сравнения со стандартом, метод добавок, метод внутреннего стандарта. Области применения, преимущества и недостатки методов.
15. Чувствительность флуориметрических методов анализа. Коэффициент чувствительности, предел обнаружения, нижняя граница определяемых концентраций, диапазон измеряемых концентраций.
16. Зависимость люминесцентных характеристик от внешних факторов. Влияние температуры, рН, полярности растворителя, концентрации, светорассеяния образца.
17. Эффекты внутреннего фильтра. Эффекты экранировки и реабсорбции.
18. Время жизни возбуждённого состояния. Излучательное и реальное время жизни. Связь с квантовым выходом люминесценции.
19. Тушение люминесценции. Статическое и динамическое тушение. Уравнение Штерна-Фольмера.